【BUNSEN本生】ELISA試劑盒的原理及儲存方法?

　　ELISA試劑盒為捕獲抗體具有高親和力、高特異性、低內毒素的單抗，研究者以刺激劑激活細胞時，不會影響活化細胞分泌細胞因子。ELISA試劑盒的原理是什么?

　　到目前為止，ELISA法仍在研究當中占有著主流地位，普遍應用使得實驗更加方便、經濟和準確， ELISPOT技術的優點也決定了它的發展潛力。LISPOT法來源于ELISA，相比較傳統的ELISA法有所突破，是定量ELISA技術的延伸和發展。由于游離的循環抗體或CK的半哀期不同，使之在體液中不斷的被代謝或與靶器官結合，傳統的酶聯免疫吸附法(ELISA法)不能確切的反映體內的抗體及CK的水平。

　　ELISA試劑盒的原理包括了可以提了兩款改良型siRNA用于活體轉染?？梢栽黾觭iRNA-轉運試劑復合體的穩定性。而SIRNAPLUS則不需要轉運試劑，其轉運載體就整合在siRNA分子上。為了解決這一問題，公司開發了一個試劑盒，可以將shRNA插入到基因組的特定位置。這一靶向整合試劑盒采用鋅指核酸酶技術，將 shRNAELISA試劑盒插入到人類基因組的AAVS1位點。這一技術將shRNA定位在一個地方，使影響shRNA表達水平的一個重要變量固定下來。

　　ELISA試劑盒普遍用作非放射性同位素的成鍵化驗。在這種方法中，通常標準配體是固定的，通過加入溶液相受體或蛋白質來使之成鍵。通過加入與受體特異性反應的抗體來定量成鍵的受體，而且一開始抗體的量以加入第二種能顯色的抗體測量。第二種抗體能識別抗體的末端，在其末端的堿性磷酸酯或過氧化物酶等與酶發生反應，從而使溶液顯色。

　　ELISA試劑盒：準備與貯存

　　ELISA試劑盒收到后立即貯存于2-8℃下，效期見試劑盒標簽;所有成分在2-8℃下可保存至有效期。使用前，所有試劑平衡至室溫，不同批次的試劑不能交換使用。

　　1. 包被板，96孔，包被了抗人胎球蛋白A抗體;微孔板固定于板架上，密封于含有干燥劑的鋁箔密封袋內;貯存于2-8℃至有效期。

　　2. 胎球蛋白A示蹤抗體，1瓶，0.6 ml，濃縮，HRP標記的抗人胎球蛋白A示蹤抗體溶于穩定的蛋白基質中;此試劑使用前需用示蹤劑抗體稀釋液進行稀釋;貯存于2-8℃至有效期。

　　3. 示蹤抗體稀釋液，1瓶，11ml，即用，Trizma鹽酸溶于緩沖液;根據實驗步驟用于示蹤抗體稀釋;貯存于2-8℃至有效期。

　　4. 試驗緩沖液，濃縮，1瓶，11ml，含牛血清白蛋白的磷酸緩沖鹽;建議使用前以1:10比例用雙蒸水稀釋(如11 ml濃縮+99 ml的雙蒸水);貯存于2-8℃至有效期。

　　5. 洗滌液，濃縮，1瓶，20ml，30倍濃縮;試驗前需用580ml的雙蒸水稀釋，混勻;一旦稀釋，不含疊氮化物防腐劑的磷酸緩沖鹽洗滌液會含表面活性劑;稀釋的洗滌液在室溫下可保存至效期。

　　6. HRP底物液;1瓶，12ml，含過氧化氫的TMB底物液;貯存于2-8℃至有效期。

　　7. 終止液，1瓶，12ml，0.5M硫酸，貯存于2-8℃至有效期。

　　8. 胎球蛋白A標準品，5瓶，含胎球蛋白A，不含疊氮化物防腐劑的液態牛血清基質;各標準品濃度見瓶子標簽;3次凍存周期使用后，所有標準品保存至-20℃或更低。

　　9. 胎球蛋白A質控，2瓶，含人胎球蛋白A，不含疊氮化物防腐劑的液態牛血清基質，各質控的精確濃度范圍見瓶子標簽，3次凍存周期使用后質控保存至-20℃或更低。

　　保存——如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

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