知識(shí)問(wèn)答：ELISA常見(jiàn)問(wèn)題解答

1、試劑盒從冰箱拿出后未充分平衡室溫，會(huì)有什么影響?

如果試劑盒從冰箱中拿出后未充分平衡至室溫(20～25℃)，可能會(huì)導(dǎo)致溫育時(shí)間不夠，從而使OD值偏低。

2.、移液器吸液量不足或吸頭內(nèi)壁不清潔，會(huì)造成什么后果?

移液器吸液量不足或吸頭內(nèi)壁不清潔，都可能導(dǎo)致加樣量不足，造成OD值偏低。此外，吸頭內(nèi)壁不清潔還可能導(dǎo)致非特異性吸附，進(jìn)一步影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

3、操作順序顛倒或遺漏步驟，會(huì)有什么后果?

如果操作順序顛倒或遺漏步驟，很可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗，例如漏加酶結(jié)合物、顯色劑等，使整塊ELISA板都不顯色。

4、溫育時(shí)間不夠或溫育溫度未達(dá)到要求，會(huì)有什么影響?

溫育時(shí)間不夠或溫育溫度未達(dá)到要求，都會(huì)影響反應(yīng)的進(jìn)行，導(dǎo)致OD值偏低。例如，保溫用的濕盒沒(méi)有預(yù)溫，或培養(yǎng)箱溫度不符合操作要求等。

5、洗板液在配置過(guò)程中出現(xiàn)問(wèn)題，會(huì)造成什么后果?

洗板液在配置過(guò)程中出現(xiàn)問(wèn)題，如量筒不干凈、含有酶抑制物、濃度過(guò)高等，都可能導(dǎo)致洗去特異性結(jié)合物，使OD值偏低。

6、洗板時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、洗板次數(shù)過(guò)多，會(huì)有什么影響?

這些操作都可能導(dǎo)致洗去結(jié)合在包被板的特異性結(jié)合物，從而使OD值偏低。

7、加完終止液后沒(méi)有輕輕充分混勻ELISA板液就立即讀數(shù)或放置太久才進(jìn)行讀數(shù)，會(huì)有什么影響?

這可能導(dǎo)致檢測(cè)OD值偏低或偏高。一般建議在加完終止液后3分鐘之內(nèi)進(jìn)行讀數(shù)。

8、酶標(biāo)儀檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)定有誤，會(huì)有什么后果?

如果酶標(biāo)儀檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)定有誤，例如選用的波長(zhǎng)不是產(chǎn)物的敏感吸收峰，可能會(huì)導(dǎo)致OD值偏低或偏高。

9、陰性對(duì)照出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，可能的原因是什么?

陰性對(duì)照出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果可能是由于樣品、試劑被污染，或加樣時(shí)操作不當(dāng)導(dǎo)致相鄰孔之間溶液濺灑出現(xiàn)交叉污染。此外，抗體量過(guò)多導(dǎo)致非特異性結(jié)合也可能是一個(gè)原因。

10、酶標(biāo)板整體背景高，可能的原因是什么?

酶標(biāo)板整體背景高可能是由于底物孵育過(guò)程沒(méi)有避光，導(dǎo)致背景信號(hào)增強(qiáng)。

11、復(fù)孔之間重復(fù)性差，可能的原因是什么?

復(fù)孔之間重復(fù)性差可能是由于加樣本及試劑量不準(zhǔn)、孔間不一致等原因造成的。此外，操作條件、人員等的不一致也可能導(dǎo)致重復(fù)性差。

12、陽(yáng)性對(duì)照值偏低或低吸光度，可能的原因是什么?

陽(yáng)性對(duì)照值偏低或低吸光度可能是由于溫育的時(shí)間或溫度不夠、顯色反應(yīng)時(shí)間太短、顯色液變質(zhì)或試劑過(guò)期、試劑稀釋有誤等原因造成的。

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