ELISA實驗過程中出現(xiàn)溢值的原因分析

以下是天津本生對ELISA實驗中出現(xiàn)溢值(OD值超出檢測范圍)的常見原因及解決方案：

一、樣本與標(biāo)準(zhǔn)品問題

稀釋錯誤‌

樣本或標(biāo)準(zhǔn)品未按說明書要求稀釋，濃度過高導(dǎo)致信號過強。

解決‌：嚴(yán)格遵循稀釋比例，使用試劑盒配套稀釋液。

樣本污染‌

樣本混入雜質(zhì)(如溶血、細(xì)菌污染)或交叉污染，引發(fā)非特異性反應(yīng)。

解決‌：離心處理樣本，避免重復(fù)使用吸頭，操作時分區(qū)處理樣本。

　　二、實驗操作因素

孵育條件不當(dāng)‌

溫度過高或時間過長，加速抗原抗體結(jié)合及底物顯色。

解決‌：校準(zhǔn)孵育箱溫度，使用計時器控制時間。

未覆蓋酶標(biāo)板‌

孵育時未蓋板導(dǎo)致液體蒸發(fā)，局部濃度升高。

解決‌：每次孵育均使用配套封板膜。

顯色時間過長‌

TMB底物顯色超過說明書建議時間，OD值異常升高。

解決‌：顯色后密切觀察，及時終止反應(yīng)。

三、試劑與設(shè)備問題

偶聯(lián)試劑濃度過高‌

HRP標(biāo)記抗體或鏈霉親和素未正確稀釋，信號放大過度。

解決‌：按說明書現(xiàn)配現(xiàn)用，避免濃縮液直接使用。

檢測波長錯誤‌

酶標(biāo)儀波長設(shè)置與底物要求不匹配(如TMB應(yīng)為450nm)。

解決‌：校準(zhǔn)儀器，核對說明書波長參數(shù)。

洗滌不充分‌

未結(jié)合的試劑殘留導(dǎo)致背景升高，間接引發(fā)溢值。

解決‌：增加洗滌次數(shù)(3-5次)，拍干孔內(nèi)液體。

四、其他注意事項

避免使用錯誤稀釋液‌：僅使用試劑盒內(nèi)配套稀釋液。

分裝試劑‌：避免反復(fù)凍融導(dǎo)致活性異常。

質(zhì)控對照‌：設(shè)置陰陽性對照，監(jiān)控實驗系統(tǒng)穩(wěn)定性。

通過排查上述環(huán)節(jié)并規(guī)范操作，可有效減少溢值現(xiàn)象。

注：以上資料僅供參考，不作為實驗依據(jù)，具體請咨詢技術(shù)老師或產(chǎn)品品牌供應(yīng)商。

天津本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。