凍存管樣本保存操作指南

　　一、樣本預處理

　　細胞樣本?

　　消化后離心(1500rpm，5分鐘)，棄上清，加入凍存液(如含5-10% DMSO的無血清凍存液)重懸，細胞濃度建議1×10^6/mL?

　　凍存體積不超過凍存管容量的75%(如2mL凍存管裝1.5mL以內)，避免凍脹破裂?

　　菌種樣本?

　　瓷珠法?：刮取菌苔與瓷珠混合，吸除多余液體后凍存?

　　甘油法?：菌液與50%甘油按1:1混合，終濃度25%甘油?

　　二、凍存操作流程

　　分裝與標記?

　　使用耐低溫標簽或激光刻碼標記管體，避免信息丟失?

　　擰緊管蓋(雙螺紋設計更佳)，防止液氮滲入?

　　降溫程序?

　　梯度降溫?：4℃→-20℃→-80℃→液氮氣相層(-196℃)，避免冰晶損傷細胞?

　　程序降溫盒?：可替代手動梯度，實現均勻降溫?

　　三、存儲注意事項

　　存儲方式? ?風險控制?

　　液氮氣相層 避免直接浸泡，防止管體爆裂?

　　-80℃冰箱 確保溫度穩定，避免反復凍融?

　　四、復蘇與安全規范

　　快速復溫?：37℃水浴中輕柔搖晃至冰晶融化，避免高溫長時間暴露?

　　防護措施?：

　　佩戴防凍手套、護目鏡，防止液氮濺傷或管體炸裂?

　　復蘇操作在生物安全柜內進行?

　　五、常見問題

　　滲漏風險?：檢查膠圈密封性，避免使用老化凍存管?

　　冰塞現象?：均勻降溫可減少壓力積聚導致的管體破損?

　　注：以上資料僅供參考，不作為實驗數據，具體請咨詢品牌供應商或技術老師;

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