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ELISA板包被原理
ELISA板包被是通過物理吸附或化學偶聯將目標分子(抗原/抗體)固定在微孔板表面的關鍵步驟,其原理和操作要點如下:
1. ?包被的基本原理?
物理吸附(被動包被)?
聚苯乙烯微孔板的疏水性表面在堿性緩沖液(如pH 9.6的碳酸鹽緩沖液)中,通過疏水相互作用和靜電吸附固定蛋白質?。適用于大多數大分子(如抗體、病毒蛋白),但小分子(如肽段<10個氨基酸)因吸附能力弱需采用化學偶聯?。
化學偶聯(主動包被)?
使用交聯劑(如EDC/NHS)將蛋白質的氨基或羧基與微孔板表面共價結合,適用于小分子抗原、多糖等不易吸附的分子?。
2. ?關鍵操作步驟?
緩沖液選擇?:常用碳酸鹽緩沖液(pH 9.6)優化蛋白質吸附?。
封閉處理?:包被后需用BSA或脫脂奶粉封閉未結合位點,減少非特異性結合?。
溫度與時間?:4℃過夜包被可增強結合穩定性,37℃孵育適用于快速實驗?。
3. ?注意事項?
小分子包被?:需通過載體蛋白(如KLH)偶聯或化學交聯提高吸附效率?。
洗滌控制?:包被后需洗滌去除未結合分子,避免干擾后續反應?。
通過合理選擇包被方法及優化條件,可確保ELISA檢測的靈敏度和特異性?。
注:本試劑盒僅供科研使用,不用于臨床診斷。具體操作請以實際試劑盒說明書為準。
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